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    农业植物病理学实验指导  
    文件大小:768 KB
    资料等级:3星级
    资料类别:辅导教材
    资料格式:Word
    原 作 者:转载  E-mail
    更新时间:2007年06月06日 17时12分00秒
    下载等级:管理员,VIP用户,收费用户,普通用户,工作人员
    需要点数:5
    下载次数:

    ::资料简介::
    农业植物病理学实验指导
    实验一、水稻病害的识别与诊断

    一、 目的要求
            通过本实验要求能对水稻上发生普通为害的稻瘟病、白叶枯病、纹枯病、胡麻叶斑病、稻曲病、恶苗病、水稻烂秧病中的绵腐病等能独立诊断、鉴定;识别稻瘟病的不同症状类型,正确区分稻瘟病和胡麻叶斑病,掌握白叶枯病的简易诊断方法;并能识别其他病害的主要症状。

    二、 实验内容和方法
    (一)稻瘟病
          病原:有性阶段为Maganaporthe grisea  无性阶段为Pyricularia grisea  
        1.症状观察:取新鲜病株标本或盒装标本仔细观察叶部、穗颈、节部、谷粒上的症状。
           叶瘟症状:主要识别慢性型病斑和急性型病斑。慢性型病斑是何形状?病斑中央、内圈和外圈各是什么颜色?病斑的两端有无褐色坏死线向病斑外延伸?病斑上有无霉层?急性型病斑呈何形状?如有,注意其大小、形状、颜色。
            穗颈瘟症状:穗颈瘟发生在什么部位?呈何颜色?病变部分大约有多长?病健部交界清晰否?其上有无霉层?整穗的谷粒饱满否?
          节瘟症状:观察病节部呈何颜色?是否凹陷?
          谷粒瘟症状:观察有病谷粒上的病斑大小、颜色。谷粒饱满否?
        2.病原鉴定:当在适当温度高湿的条件下,叶部、节部、穗颈、谷粒等部位的病斑上都可产生青灰色的霉层,此为病原菌的分生孢子梗及分生孢子。先取长有青灰色的叶部病斑或穗颈病斑直接置于低倍显微镜下,观察其分生孢子梗及分生孢子的着生形状,注意分生孢子梗是单生还是数根成丛?分生孢子着生在分生孢子梗的什么部位?然后用解剖刀轻轻挑取少量霉层在载玻片的水滴中制片镜检,观察分析孢子梗及分生孢子形态。分生孢子呈何形状?有几个横隔?孢子基部有无短小的脚胞?孢子梗是何形状?
      
    (二)胡麻叶斑病
        病原:无性阶段为Bipolaris oryzae (异名:Helminthosporium oryzae
                   有性阶段为Cochliobolus migabeanus
         1.症状观察:此病从苗期到成熟期的植株地上部位均可发生,但以叶片发生最普遍,其次是谷粒、穗颈、枝梗。
    实验中主要观察叶斑症状。注意病斑的达大小、形状、颜色与稻瘟病有何区别?病斑两端有无褐色坏死线向两端延伸?
         2.病原鉴定:胡麻叶斑病的叶斑上一般很少产生孢子,病穗颈、特别是病谷粒上在潮湿的条件下较易长出黑褐色绒毛状霉。用解剖刀刮取少量病穗颈或病谷粒上的黑褐色霉层(如果只有叶斑供实验镜检病原,则要多刮取几个病斑上的病原)制片镜检。
    观察分生孢子梗的形状、颜色、分隔,注意孢子梗顶端有无着生过孢子的痕迹?分生孢子呈何形状、颜色?有几个分隔?(注意与稻瘟病菌的孢子比较)。
         3.鉴别胡麻叶斑病与稻瘟病的方法:由于胡麻叶斑病的叶斑与稻瘟病的叶斑有时容易混淆,穗颈部和谷粒上的病斑二者更难区分,简易的诊断方法是:
        (1)田间现场判断:稻瘟病多易发生在土壤肥沃、稻株生长嫩绿、茂密的田块和地段,它在田间的分布在开始时多有发病中心:而胡麻斑病多发生在土壤比较贫瘠、缺肥,植株生长不良的田块或地段,它在田间的分布比较均匀,没有明显的发病中心。
        (2)将待鉴别的病叶或病穗颈、谷粒等在28℃左右的湿度下保湿培养,1-2天后,稻瘟病不论是病叶、病穗颈和病谷粒都易生长出青灰色霉层:而胡麻斑病的病叶一般不易长出特征性的霉层。胡麻叶斑病的病穗颈和病谷粒上较易长出霉层,但霉层为黑褐色绒毛状,易与稻瘟病区分。再将病部长出的病原菌制片镜检,二病的病原菌则是显然不同,极易鉴别。
                            
                
    (三)稻纹枯病
        病原:无性阶段为:Rhizoctonia solani
                        有性阶段为:Pellicularia sasakii
         1.症状观察:取稻株观察稻株基部叶鞘上的病斑的形状、颜色(注意初期病斑的形状、颜色和中后期病斑的形状、颜色有何区别?);病部是否附有白色戎状的菌丝团(将形成菌核)和暗褐色或土黄色的菌核?菌核呈何形状?仔细看,可否看到稻丛基部的株间有蛛丝状的菌丝体连接着?最后,再看看稻株中、上部茎杆及叶片上的症状及何种颜色?稻穗有无发病?呈何状态?(请考虑:植株上部乃至穗部发病,意味着什么?)
         2.病原鉴定:取人工培养的菌丝体制片镜检,观察菌丝有无颜色?菌丝分枝处是否缢缩?离分枝不远处有分隔否?再挑取集结在一起即将形成菌核的菌丝体团上的菌丝制片镜检,观察这种老熟菌丝性状如何分隔与前述菌丝有何不同?再取菌核在低倍镜下观察,表面呈何状态?剖视菌核,内外层颜色是否一致?呈何颜色?

    (四)水稻白叶枯
        病原:Xanthomonas oryzea pv.oryzae (原名:Xanthomonas oryzae
           1.症状观察:
        (1)普通症状:取新鲜病叶或蜡叶标本,观察病斑发生的部位,病斑的大小、性状和颜色。仔细观察病健交界处是否清晰?呈何形状?病部有无菌胶?菌胶大小如何?呈何颜色?
        (2)急性型症状:病叶上的病斑呈何形状?何种颜色?(与典型症状差别甚大,是何原因?)
          2.病原鉴定:白叶枯病菌是一种细菌。鉴别所分离的细菌是否为白叶枯,要从培养性状、形态特征、染色反应、生理生化反应、接种试验等方面进行观察和试验。这不是一两次实验所能完成的。较快速准确的鉴别手段是血清学反应和噬菌体测定。但血清学反应试验得预先准备白叶枯病菌的抗血清;噬菌体测定则需预先准备白叶枯病菌的噬菌体。本实验只作以下白叶枯病菌的简易诊断。
        3.白叶枯病的简易诊断方法
        首先进行症状的仔细观察,对有些症状不够经典,不易确诊的病叶可作如下简易诊断:
        (1)观察细菌喷菌现象:剪取可疑待检的病健交界处一小块。约2mm*3mm,放在载玻片的蒸馏水滴中,加盖玻片,静置1-2分钟,用手持扩大镜或低倍显微镜观察,看小块的两端切口处有无细菌溢从维管束中溢出。如果有大量烟雾状的细菌从维管束中溢出,则证明是白叶枯病。(但请注意,水稻细菌性条斑病、细菌性褐条病,用此法观察,也有细菌从维管束中溢出,因此,必须结合症状加以区分,水稻的自然枯黄叶用此法观察,没有细菌溢溢出,容易鉴别。)
        (2)保湿法:剪取供检验的可疑病叶的病健交界部一小段,长约1-2寸,分别插在培养皿中的洗净的湿沙中,然后加盖一个大约适宜的烧杯,让其保湿,经5-6小时以后,如果叶片上端的切口处有黄色混浊的露珠状菌脓,则证明是白叶枯病(注意点同上)。
                      
    (五) 稻曲病
        病原:Ustilaginodea virens
        
    分类地位:    有性时期:子囊菌亚门核菌纲球壳菌目、麦角菌科、绿核菌属(又名“拟黑粉菌属”);
                               无性时期:半知菌亚门、丝孢纲、从梗孢目、瘤座孢科、绿核菌属(拟黑粉菌属)。
        1.症状观察:取病穗观察病粒形状、大小、颜色,一个穗中有多少个病粒?包在谷粒外的块状物为何物?其上的墨绿色粉末为何物?再观察病粒的剖面,内外颜色相同否?可分为几层?各为什么颜色?
        2.病原鉴定:取病粒表面墨绿色的粉状物(病菌的厚垣孢子)制片镜检,观察厚垣孢子的颜色、形状、表面有无疣状突起?再取病菌的菌核观察其形状、颜色、大小,最后镜检永久玻片。观察子囊壳和子囊孢子的形状。子囊壳和子囊孢子各呈什么形状?

    (六) 水稻恶苗病
        病原:
        有性时期:Gibberella fujikuroi(分类地位:子囊菌亚门、核菌纲、肉座菌目、肉座菌科、赤霉属。)
        无性时期:Fusarium moniliforme(分类地位:半知菌亚门、丝孢纲、从梗孢目、疣座孢科、镰刀菌属。)
        1.症状观察:取病株观察,并与健株比较,病株是否比健株高得多?节间是否显著伸长?病株颜色比健株淡还是深?再看病株的中下部的节部弯曲否?是否露出叶鞘外?节上有无倒生的不定根?剥开病株叶鞘,节的上下呈何色?茎上有无暗褐色条斑?在垂死株或病死株的叶鞘和茎杆上有无淡红色或白色的粉状物?这是病原菌的什么时期?
        2.病原鉴定:在垂死或已病死的病株上,或经过保湿培养的茎杆上,刮取少量淡红色粉状物,制片镜检,观察病菌无性时期大、小孢子的形态,大孢子呈何形状?有几个分隔?基部有无足胞?小孢子呈何形状?有无分隔?见到成链状着生的现象否?
                                  
    (七) 水稻绵腐病
        病原:主要是Achlya spp.的真菌(包括层出绵霉A.Prolifera和稻绵霉A.oryzae等)
        分类地位:鞭毛菌亚门、卵菌纲、水霉目、水霉科、绵霉属。
        1.症状观察:取感病谷粒观察,可见病谷粒四周呈放射状地长出白色绵毛状物(此为病菌菌丝体和孢子囊等),这是此病的显著特征。病谷粒不能发芽,即使已发芽也常因基部腐烂而枯死。
        2.病原鉴定:取病谷粒周围的绵毛状物少许,制片镜检。观察病原菌的孢子囊、藏卵器、雄器卵孢子形态。它们各呈何形状?藏卵器内有几个卵球?能否看到游动孢子从孢子囊溢出后聚集在孢子囊开口处的状态?

    (八) 稻黄矮病
        病原:水稻黄矮病毒(Rice Yelow Stunt Virus,缩写为RYSV)
        症状观察:先取病株观察整株症状,植株比健株是否变矮?节间短否?株形是否松散?再观察叶片,叶色是否发黄?有没有见到叶肉黄色而杂有碎绿斑块、叶脉仍保持绿色的症状?叶片有无错位现象?

    (九) 稻普通矮缩病(简称“稻普矮病”)
        病原:水稻普通矮缩病毒(Rice Dwarf Virus-缩写为RDV)
        症状观察:先取病株观察整株症状。病株是否比健株明显变矮?也比黄矮病株明显矮吗?全株颜色比健株深还是浅?分蘖是否比健株增多?再观察病株叶片。叶片是否比健株短小僵直?叶色浓绿否?叶片上能否看到虚线状断续的白色点条?
                                  
    (十) 稻粒黑粉病
        病原:Neovossia horrida
        分类地位:担子菌亚门、冬孢菌纲、黑粉菌目、黑粉菌科、刺黑粉菌属
        1.症状观察:取病穗盒装标本观察,看病粒与健粒有何区别?病粒变色否?谷壳内外颖壳间有无开裂露出黑色角状物?谷粒外有没有散落黑粉状物?此黑粉状物为何物?
        2.病原鉴定:取病谷粒内的黑粉制片镜检,观察冬孢子的形态。冬孢子呈何状?什么颜色?冬孢子表面有何特征?

    (十一)稻云形病
        病原:
        有性时期为Metasphaeria albescens(分类地位:子囊菌亚门、腔囊菌纲、隔孢菌目、隔孢菌科、亚球腔菌属。)
        无性时期为:尚未定论。有人认为是Rhynchosprium oryzae;有人认为是Fusoma triseptaumFusoma biseptatum;也有人认为是Fusarium sp.
        症状观察:取病叶观察,病斑主要发生在叶片的什么部位?病斑上有无暗褐色波浪形云纹?病健交界部清晰否?附近有无白色粉末状物(病菌的分生孢子)?

    (十二)稻褐色叶枯病
        病原:尚未定论。有的认为是Fusarium sp.,有的认为是Fusarium nivale,也有的认为是与云形病的病原物可能相同。
        症状观察:取病叶观察病斑的形状、颜色、大小,注意病斑周围黄色晕圈宽否?病健交界清楚否?叶鞘上病斑呈何状态?

    (十三)稻干尖线虫病
        病原:Aphelenchoides besseyi
        分类地位:线虫纲、侧尾线口亚纲、垫刃目、滑刀总科、滑刃线虫属。
        症状观察:
        叶部症状:主要观察叶片上病部表现在什么部位?呈何颜色?何状态?病健交界明显否?
        穗部症状:注意全穗表现的症状是什么?部分小穗和部分谷粒表现的症状有什么特征?

    (十四)稻赤枯病
        病原:生理性病害。土壤环境不良、缺钾是主要原因。
        症状观察:先观察病株的全株症状,病株是否比健株矮小?分蘖和植株颜色是否正常?叶片是否僵直不披?再看叶片上有无碎屑状的赤褐色小点和与胡麻斑病类似的褐色病斑?基部叶片有无从叶尖向下逐渐变黄褐色枯死的现象?病株根部呈何颜色?

    三、作业
        1.绘下列病原菌形态图
        (1)稻瘟病菌和胡麻叶斑病菌的分生孢子梗、分生孢子。
        (2)稻恶苗病菌的分生孢子。
        (3)稻绵腐菌的游动孢子囊和藏卵器。
        2.如何准确鉴别稻瘟病和胡麻叶斑病?

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